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作成したアプリが使用中のファイルを実行中に変更されたくないので「〜によってファイルは開かれているため、操作を完了できません。ファイルを閉じてから再実行してください。」の表示が出るようにしてファイルに変更・削除を禁止にしたいのですが可能でしょうか。

win32apiのCreateFileを使ってロックでどうでしょう？
引数３つ目、dwShareModeの値を0にします。
終了時には必ずCloseHandleするように。

#uselib "KERNEL32.DLL"
    #func global CreateFile "CreateFileA" sptr,sptr,sptr,sptr,sptr,sptr,sptr
    #func global CloseHandle "CloseHandle" sptr

#define global GENERIC_READ     0x80000000
#define GENERIC_WRITE           0x40000000
#define OPEN_EXISTING           0x00000003

    dim fhandle //ファイルハンドル

    button gosub "LockFile", *Button1
    button gosub "UnlockFile", *Button2

    onexit *CLOSE
    stop

    // 実行ファイルがあるフォルダの1.txtをロック
    //3つ目(dwShareMode)を0にする
    *Button1
        lpFileName = dir_exe +"\\1.txt"
        CreateFile lpFileName, GENERIC_READ | GENERIC_WRITE, 0, 0, OPEN_EXISTING, 0, 0
        fhandle = stat
        mes "ロックしたよ"
        return

    *Button2
        CloseHandle fhandle
        mes "ロック解除したよ"
        return

    *CLOSE
        CloseHandle fhandle

end

ありがとうございます！